Dried Blood Spot Testing for Seven Steroids Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry With Reference Interval Determination in the Korean Population

BACKGROUND: Conventional screening for congenital adrenal hyperplasia (CAH) using immunoassays generates a large number of false-positive results. A more specific liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method has been introduced to minimize unnecessary follow-ups. However, because of limited data on its use in the Korean population, LC-MS/MS has not yet been incorporated into newborn screening programs in this region. The present study aims to develop and validate an LC-MS/MS method for the simultaneous determination of seven steroids in dried blood spots (DBS) for CAH screening, and to define age-specific reference intervals in the Korean population. METHODS: We developed and validated an LC-MS/MS method to determine the reference intervals of cortisol, 17-hydroxyprogesterone, 11-deoxycortisol, 21-deoxycortisol, androstenedione, corticosterone, and 11-deoxycorticosterone simultaneously in 453 DBS samples. The samples were from Korean subjects stratified by age group (78 full-term neonates, 76 premature neonates, 89 children, and 100 adults). RESULTS: The accuracy, precision, matrix effects, and extraction recovery were satisfactory for all the steroids at three concentrations; values of intra- and inter-day precision coefficients of variance, bias, and recovery were 0.7-7.7%, -1.5-9.8%, and 49.3-97.5%, respectively. The linearity range was 1-100 ng/mL for cortisol and 0.5-50 ng/mL for other steroids (R2>0.99). The reference intervals were in agreement with the previous reports. CONCLUSIONS: This LC-MS/MS method and the reference intervals validated in the Korean population can be successfully applied to analyze seven steroids in DBS for the diagnosis of CAH.

Effect of different intensities of swimming exercise on testicular oxidative stress and reproductive dysfunction in mature male albino Wistar rats.

Swimming exercise for 1, 2 and 3 hr for 5 days/week for consecutive 4 weeks, results in a significant reduction in testicular, epididymal, prostetic, seminal vesicle somatic indices; epididymal sperm count, sperm motility; preleptotine spermatocytes, mid pachytene spermatocytes and stage 7 spermatids; plasma levels of testosterone, luteinizing hormone; testicular delta5, 3beta-hydroxysteroid dehydrogenase, 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase; testicular superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase, glutathione-s-transferase and glutathione along with significant elevation in malondialdehyde in male albino rats. However, no significant change was noted in final body weight, spermatogonia-A and plasma level of follicle stimulating hormone. The results that oxidative stress develops with the increasing of exercise intensity, which may interfere in male reproductive activities.

Interrelaçöes entre SHBG e esteróides sexuais com medidas antropométricas, pressäo arterial e lipídios em mulheres com e sem diabetes mellitus tipo 2 / Interrelationship between SHBG and sexual steroids with anthropometric measurements, arterial pressure and lipids in women with and without diabetes mellitus type 2

Com o objetivo de analisar as concentrações plasmáticas de SHBG, dos esteróides sexuais, perfil glicídico, lipídico e suas relações com variáveis clínicas, demográficas e medidas antropométricas, estudamos um grupo de 80 mulheres na pós-menopausa, 40 com diabetes mellitus (DM) tipo 2, com idade de 64,9ñ7,1 anos e duração conhecida do diabetes de 13,4ñ1,4 anos e 40 não diabéticas com idade de 61ñ8,9 anos. Foram analisados: idade, índice de massa corporal (IMC), relação cintura-quadril (RCQ), cintura, pressão arterial sistólica (PAs) e diastólica (PAd). As mulheres diabéticas apresentaram maior freqüência de distribuição andróide de gordura (75 por cento vs. 50 por cento, p= 0,03), maior PAs (p= 0,01), maior testosterona total (p= 0,003), índice de testosterona livre (p= 0,002) e índice de resistência insulínica (IRI) (p= 0,000) do que as mulheres não diabéticas. As não diabéticas com distribuição andróide de gordura apresentaram menores níveis de SHBG do que aquelas com distribuição ginecóide (p= 0,008). No grupo com IMC ü30kg/m2 e no grupo com cintura ü88cm, as mulheres diabéticas apresentaram maior testosterona total e índice de testosterona livre do que as mulheres não diabéticas. As não diabéticas com distribuição andróide de gordura apresentaram maior índice de testosterona livre do que aquelas com distribuição ginecóide (p= 0,01). As diabéticas com distribuição andróide apresentaram maiores níveis de estradiol do que aquelas com distribuição ginecóide (p= 0,02). Em conclusão, mulheres diabéticas apresentaram maior freqüência de distribuição abdominal de gordura, estando associada à maiores concentrações de testosterona total, índice de testosterona livre e estradiol e menores concentrações de SHBG. Estes dados sugerem que o hiperandrogenismo com diminuição de SHBG, possam ser indicadores da síndrome de resistência insulínica, e poderiam, de alguma forma, agravar o grau de resistência nestes pacientes.

Variaçäo dos esteróides e da pressäo arterial na gestaçäo normal / Steroids and blood pressure variation throughout normal pregnancy

A variaçäo circadiana dos níveis séricos da aldosterona, cortisol, estradiol, progesterona, sódio, potássio e da pressäo arterial média (PAM) foi avaliada em um estudo transversal durante o ciclo gestacional normal. Amostras sanguíneas foram coletadas com as 25 gestantes em decúbito lateral esquerdo, entre 22:00 e 24:00 horas e entre 7:00 e 10:00 hors, no dia seguinte. As medidas pressóricas foram determinadas a cada 30 minutos através de um monitor de pressäo arterial näo invasivo Collin 8000 e Dixtal modelo DX 270 por 24 horas a partir das 9:00 horas. Identificou-se níveis hormonais, eletrolíticos e pressóricos elevados no período da manhä em todo o ciclo gravídico. exceto a aldosterona e o estradiol, cujo aumento só foi observado nos 1º e 3º trimestres, respectivamente. Os níveis do cortisol, estradiol e progesterona aumentaram em ambos os horários no 3º trimestre. Houve correlaçäo positiva entre os níveis matinais de estradiol e cortisol, dos diurnos e noturnos do estradiol e progesterona, dos noturnos de sódio e potássio e dos noturnos de aldosterona e PAM. Houve correlaçäo inversa entre os níveis matinais de sódio e aldosterona. Os resultados sugerem a presença de um rítmo circadiano para a maioria das variáveis estudadas com repercussöes hemodinâmicas ao longo da gestaçäo

Pseudohermafroditismo masculino por deficiencia enzimática de 17 alfahidroxilasa; primer caso reportado en Puerto Rico / Male pseudohermaphroditism caused by enzymatic deficiency of 17-alpha-hydroxylase. 1st case reported in Puerto Rico

A 36 year old white female came to our service after having been evaluated on repetitive occasions in the past for a workup of gigantism and acromegalic features. Since childhood she had developed tall stature, frontal bossing, prominence of zygomatic bones, separated teeth, large hands and size 14 shoes. Human growth hormone and somatomedin serum levels had been normal on all occasions tested. Her past history was significant for primary amenorrhea and a 12 year history of hypertension. On physical examination BP was 140/100, height 6' 2[quot ], weight 2571 bs. Her phenotype was truly acromegalic. There was absence of axillary and pubic hair with no breast development. External genitalia was of female appearance. Laboratory evaluation showed increased FSH of 88 mlU/ml, increase LH of 65.6 mlU/ml and decreased E2 of 12.6 pg/ml. Other findings were low serum cortisol of 0.2 mg/dl, high ACTH of 344 pg/ml, low 17-Ketosteroids, high pregnenolone levels of 595 mg/dl, low 17-hydroxypregnenolone less than 10 ng/dl, very high aldosterone of 31 ng/dl and suppressed PRA of less than 0.1 ng/ml. A pelvic sonogram showed a right ovoid structure which could represent a gonad and failed to identify the uterus and left gonad. A bone densitometry showed a decrease bone mineral density compatible with osteoporosis. Chromosome study showed a karyotype of 46-XY. A diagnosis was made of congenital adrenal hyperplasia secondary to 17-alpha-hydroxylase deficiency in a genotypic male. Our patient was referred to the department of gynecology for surgical removal of the gonads. It is amazing how a patient with severe adrenal insufficiency can withstand 36 years of her life undiagnosed without going into an adrenal crisis. Her tall stature and acromegalic features were the striking signs confusing all physicians and delaying the correct diagnosis and appropriate treatment. There has been reported worldwide, nearly 120 cases with documented severe 17-alpha-hydroxylase deficiency. To our knowledge this is the first case identified in Puerto Rico of male pseudohermaphroditism secondary to 17-alpha-hydroxylase enzyme deficiency

Effect of contact with female hormones on human serum

In this paper, the effect of continuous contact with steroid hormones on workers in pharmaceutical factories was studied using radioimmunoassay method [RIA]. The results showed that out of 30 female cases in which some abnormal levels of hormones were detected in their sera, five cases showed prolactin and seven cases showed estradiol and progesterone. Concerning the tested male cases, only two cases out of four showed abnormal levels of prolactin

Critérios diagnósticos das formas näo-clássicas de hiperplasia adrenal congênita / Diagnostic criteria of non-classic forms of congenital adrenal hyperplasia

A hiperplasia adrenal congênita (HAC) resulta de deficiência herdada em uma das várias enzimas necessárias para a síntese do cortisol. Deficiência na produçao de cortisol é comum a todas as formas de HAC, em decorrência da deficiência enzimática. Devido à existência de um mecanismo de feedback negativo entre a hipófise anterior e a supra-renal, ocorre aumento da secreçao de ACTH. Dependendo da severidade da deficicência enzimática, a concentraçao sérica de cortisol pode ou nao ser normalizada; porém sempre acompanhado de elevaçao dos esteróides precursores, resultando, nas formas clássicas de HAC, de alteraçoes bioquímicas e fenotípicas. O grau do bloqueio determina qual precursor estará elevado, enquanto que a severidade da deficiência enzimática determinará a extensao do comprometimento clínico. A forma nao-clássica da HAC diferencia-se da forma clássica pelo fato de os indivíduos afetados manifestarem sinais e sintomas de excesso androgênico tardiamente, ma infância ou adolescência, através de um espectro clínico variável, como pubarca precoce, acne, hirsutismo, distúrbio menstrual e infertilidade, podendo até mesmo nao manifestar sintomas, na chamada forma críptica da doença. O diagnóstico da forma nao-clássica de HAC, em geral, nao pode ser feito levando-se em consideraçao apenas a concentraçao basal dos hormônios esteróides, uma vez que estes podem se encontrar normais ou em concentraçao similar à das demais síndromes hiperandrogênicas. A dosagem dos hormônios esteróides após estímulo com ACTH sintético é o método que se impoe para o diagnóstico. Entretanto, os critérios diagnósticos ainda nao se encontram estabelecidos.

Análise qualitativa e quantitativa do sêmen humano em casais inférteis: fatores de prognóstico / Qualitative and quantitative analysis of human semen in infertile couples: prognostic factors

Frente a controvérsia existente na literatura sobre qual a característica do sêmen que mais influencia seu poder de fertilizaçäo de ovócitos, procuramos neste trabalho avaliar 1) os espermogramas realizados para investigaçäo do casal infértil, 2) o resultado das capacitaçöes do sêmen realizadas para teste de capacitaçäo e fertilizaçäo assistida (IUI e FIVETE) e 3) a correlaçäo entre os diversos parâmetros de avaliaçäo do sêmen e a fertilizaçäo de ovócitos. Para isto, foram avaliados 385 espermogramas, 101 capacitaçöes de sêmen e 30 procedimentos de fertilizaçäo assistida (FIVETE), realizados no Setor de Reproduçäo Humana do Depto. de Ginecologia e Obstetrícia-HC-FMRP-USP. Observou-se maior freqüência da associaçäo entre as alteraçöes de motilidade e morfologia (41,6 por cento) nos espermogramas avaliados; o índice de recuperaçäo de espermatozóides após capacitaçäo obteve mediana no valor de 110 por cento e as taxas de fertilizaçäo de ovócitos foram melhores quando o número de sptz/ml foi maior de que 20 milhöes e quanto maior a motilidade progressiva. Os resultados permitem concluir que a concentraçäo de espermatozóides é o parâmetro mais importante a ser observado na amostra pré-capacitaçäo estando relacionado diretamente com o percentual de motilidade progressiva e com o índice de recuperaçäo.

Perfil hormonal da síndrome dos ovários policísticos / Hormonal profile of the polycystic ovarian syndrome

Com o objetivo de avaliar o perfil dos esteróides sexuais e gonadotrofinas na Síndrome dos Ovários Policísticos (SOP), foram estudadas 24 pacientes com SOP e comparadas a 20 mulheres normais, na fase folicular precoce do ciclo menstrual. As pacientes com SOP, quando comparadas as mulheres normais, apresentavam níveis plasmáticos basais significantemente elevados de LH, A, T, E1 e E2 e similares de FSH e DHEA-S. A relaçäo LH/FSH estava significantemente elevada e a relaçäo A/T, significantemente diminuída no grupo SOP, enquanto que as relaçöes A/E1 T/E2 estavam elevadas e E1/E2 diminuída, mas sem significado estatístico. No grupo de pacientes com SOP, observou-se correlaçäo positiva entre A e E1.

Regulación hormonal del metabolismo de glucosa en islotes de langerhans / Hormonal regulation of glucose metabolism in island of Langerhans

Se ha estudiado simultáneamente la secreción de insulina y el metabolismo de glucosa en islotes aislados, obtenidos de ratas normales, ratas con diversas insuficiencias endocrinas (adrenalectomizadas, ovariectomizadas y radioyodotiroidectomizadas), como así también grupos de animales con deprivación hormonal seguida de hormonoterapia sustitutiva. Los islotes provenientes de todos los grupos de animales con déficit endocrino mostraron alteraciones concordantes en ambos parámetros y la correlación entre los cambios en la secreción de insulina y el metabolismo de glucosa fue altamente significativa. Todos los cambios observados en estos animales hormono-deficientes fueron corregidos mediante la terapia sustitutiva específica. Estos resultados sugieren que probablemente las diversas hormonas estudiadas podrían alterar la secreción de insulina a través de una modificación en la capacidad de los islotes para metabolizar la glucosa

Effect of five ovulatory steroids on blood lipid levels

The daily oral administration of five ovulatory steroids namely: Anovlar-1, Primovlar, Ovral, Microvlar-30 and Nordette for four months induced marked increase in serum total lipids, cholesterol and triglycerides. Phospholipids were not increased after Anovlar-1 and Nordette whereas, Ovral and Microvlar-30 caused a short last increase. Primovlar, on the other hand, induced significant elevations in phospholipids started two months after drug ingestion. The data proved that there was no relation between the magnitude of changes in lipid levels and the nature of estrogenprogesterone combination. Moreover, the synergistic effects could not be excluded